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使用细菌染色液的一点心得体会,供参考
发布时间:2019-05-07   点击次数:61次
细菌染色液产品说明:
细菌鞭毛为细菌的运动器官,主要成分是蛋白质。其形态细长,直径约10-20nm,需用电子显微镜才
能观察到。所以鞭毛染色时先经媒染剂处理,使鞭毛增粗,然后再进行染色,则可在普通光学显微镜下观
察。
 
操作步骤:
取鞭毛染色液A 液9 份和 B 液1 份混合配成工作液,现用现配,建议过滤后使用。
(1) 细菌标本制备:变形杆菌接种于琼脂平板,37℃培养18-24h,仔细从菌膜迁徙生长的边缘处挑取
菌体少许,轻轻放入无菌蒸馏水试管中,经数分钟使其自行分散,再37℃放置约10min。
(2) 涂片:取上述菌液一接种环,轻轻滴于载玻片上,使成薄膜。涂抹时接种环随水滴移动,切勿与
玻片相磨,以免鞭毛脱落。
(3) 染色:涂片自然干燥(勿用火焰固定)后,滴加鞭毛染色液数滴覆盖菌膜,染色5-10min ,水洗、
吸干、镜检。
 
【预期用途】:用于抗酸性细菌的染色。
 
【检验原理】:由于抗酸性细菌具有抗酸性,在被含石炭酸的复红液染色后结合牢固,不易被酸性脱色液脱色,最终染色为红色。而非抗酸性细菌在被含石炭酸的复红液染色后结合不牢,容易被酸性脱色液脱色,经复染后最终显微镜下显示为蓝色或无色。
 
【储存条件及有效期】:15℃~30℃,避光。有效期365天。
 
【适用仪器】:光学显微镜
 
【样本要求】:选择能反映活动病程有临床价值的标本或培养物。
 
【检验方法】:
 
a) 将标本制成薄涂片,或者以接种环挑取新鲜菌落与生理盐水充分混匀制成薄涂片(若为液体菌液,挑取2~3环直接涂抹即可),自然干燥,火焰固定,滴加石炭酸复红液覆盖涂片染色5~8分钟,水洗;
 
b) 滴加硫酸美兰液覆盖涂片染色,脱色5~8分钟,水洗;
 
c) 待凉干后,显微镜下油镜检查。背景淡蓝色或无色。
 
【参考值(参考范围)】:阳性为光学显微镜油镜(10×100)下见有红色杆状菌,反之为阴性。
 
【检验结果的解释】:阳性为光学显微镜油镜(10×100)下见有红色杆状菌,反之为阴性。
 
【检验方法的局限性】:对阳性结果不能区分是强抗酸菌还是弱抗酸菌,需要用强抗酸染色液染色做对比予以确认。
 
细菌染色液使用体会和说明:
 
1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定。
 
2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果。
 
3、选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h,E.coli培养24h。若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
 
4、染色时用已知的阳性片同染作对照。

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